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    聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)操作步驟

    來源:作者:人氣:發表時間:2011/5/6 17:44:07【

    SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)操作步驟

      1.按圖安裝玻璃板

      2.按表制備分離膠(10%),將分離膠混勻后立即灌注于玻板間隙中,上層小心覆蓋一層乙醇,將膠板垂直放于室溫下,待分離膠聚合完全后,傾去上鋪乙醇,用濾紙吸干。

      3.制備濃縮膠(4%):將濃縮膠混合后直接灌注在已聚合的分離膠上,立即插入梳子,將凝膠垂直放于室溫下聚合。

      4.樣品處理:在濃縮膠聚合時,取樣品與等體積樣品緩沖液混合,100℃加熱1-2min。

      5.待濃縮膠聚合完全后,小心移出梳子,然后將膠板固定于電泳裝置上,上下槽各加入電泳緩沖液。

      6.加樣:用微量進樣器加樣,每個樣品加入20μl。

      7.電泳:在100-150V恒壓下電泳,直至溴酚藍達到膠底部,關閉電源。

      8.染色:從電泳裝置上卸下玻板,小心橇開玻板取出凝膠,放入染色液中染色2h以上。

      9.脫色:移出凝膠放入脫色液中脫色至本底無色為止。


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